在科研領域，對微量物質的精準檢測往往是揭開科學奧秘的關鍵。博清生物科技（南京）有限公司研發生產的熒光計作為一種利用物質熒光特性進行分析檢測的儀器，憑借其高靈敏度、高選擇性等優勢，在環境科學、生物醫學、化學分析等眾多實驗中發揮著不可替代的作用。本實驗將圍繞熒光計在水體污染物檢測和生物樣本熒光標記物分析中的應用展開，詳細闡述實驗設計、操作流程及結果分析，以驗證熒光計在科研檢測中的準確性與實用性。

一、 實驗目的

1、運用熒光計檢測不同濃度的多環芳烴（以蒽為例）在水體中的含量，建立標準曲線，評估熒光計對水體污染物的檢測能力及靈敏度。

2、通過熒光計測定生物樣本（小鼠血清）中熒光標記的蛋白質含量，探究熒光計在生物醫學檢測中的應用效果，為相關疾病診斷和藥物研發提供技術參考。

二、實驗設計

（一） 實驗材料

1、水樣及污染物：

超純水：用于配制標準溶液和稀釋樣品。

蒽標準品：純度≥98%，用于制備不同濃度的多環芳烴標準溶液。

實際水樣：采集自不同污染程度的河流、湖泊，經0.45μm濾膜過濾后備用。

2、生物樣本：健康小鼠血清樣本（提前采集并離心分離，-80℃保存），熒光標記的蛋白質（抗人IgG-FITC，購自專業生物試劑公司）。

3、試劑：

乙腈：色譜純，用于溶解蒽標準品。

PBS緩沖液：用于稀釋生物樣本和配制熒光標記物溶液。

牛血清白蛋白（BSA）：用于封閉非特異性結合位點。

4、儀器：

熒光計：具備激發光和發射光波長調節功能，檢測靈敏度可達10??mol/L級別。

恒溫水浴鍋：用于樣品的溫度控制。

漩渦振蕩器：用于樣品的混合均勻。

微量移液器及配套吸頭：用于準確移取試劑和樣品。

石英比色皿：用于盛放檢測樣品，確保熒光信號的準確測量。

（二） 樣本分組與處理

1、水體污染物檢測：

標準溶液組：將蒽標準品用乙腈溶解后，再用超純水稀釋，配制濃度為0μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L的系列標準溶液，每組設置3個平行樣。

實際水樣組：將采集的實際水樣分別編號，分為輕度污染水樣、中度污染水樣和重度污染水樣組，每組水樣同樣設置3個平行樣。

2、生物樣本檢測：

標準曲線組：將熒光標記的抗人IgG-FITC用PBS緩沖液稀釋，配制濃度為0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的系列標準溶液，每組設置3個平行樣。

樣本檢測組：取小鼠血清樣本，用含1% BSA的PBS緩沖液進行適當稀釋，每個樣本設置3個平行樣。

三、實驗操作步驟

（一） 水體污染物檢測

1、標準曲線繪制：

分別取不同濃度的蒽標準溶液各2mL，轉移至石英比色皿中。

將熒光計預熱30分鐘，設置激發光波長為252nm，發射光波長為380nm（蒽的特征激發和發射波長）。

依次測定各標準溶液的熒光強度，記錄數據。

2、實際水樣檢測：

取2mL過濾后的實際水樣于石英比色皿中。

按照標準曲線測定的條件，使用熒光計測定水樣的熒光強度。

若水樣熒光強度超出標準曲線范圍，用超純水進行適當稀釋后重新測定。

（二） 生物樣本檢測

1、標準曲線繪制：

取不同濃度的熒光標記蛋白質標準溶液各200μL，加入96孔黑色酶標板中。

將酶標板放入熒光計配套的檢測模塊中，設置激發光波長為488nm，發射光波長為520nm（FITC的特征激發和發射波長）。

測定各標準溶液的熒光強度，記錄數據。

2、樣本檢測：

取稀釋后的小鼠血清樣本200μL，加入96孔黑色酶標板中。

按照標準曲線測定的條件，使用熒光計測定樣本的熒光強度。

四、實驗結果分析

（一） 水體污染物檢測結果

1、標準曲線繪制：以蒽標準溶液濃度為橫坐標，對應的熒光強度平均值為縱坐標，使用Origin軟件繪制標準曲線，得到線性回歸方程y=ax+b（其中y為熒光強度，x為蒽濃度），并計算相關系數R2，確保R2≥0.99，表明標準曲線具有良好的線性關系。

2、實際水樣濃度計算：將實際水樣的熒光強度代入標準曲線回歸方程，計算出各水樣中蒽的濃度。同時，計算每組水樣濃度的平均值、標準差和相對標準偏差（RSD），評估檢測結果的準確性和重復性。

3、結果呈現：以表格形式列出標準溶液濃度、對應的熒光強度、實際水樣編號及檢測濃度；繪制柱狀圖對比不同污染程度水樣中蒽的濃度差異。

（二） 生物樣本檢測結果

1、標準曲線繪制：同樣以熒光標記蛋白質標準溶液濃度為橫坐標，熒光強度平均值為縱坐標繪制標準曲線，得到線性回歸方程及相關系數R2，確保曲線可靠性。

2、樣本濃度計算：將小鼠血清樣本的熒光強度代入標準曲線方程，計算樣本中熒光標記蛋白質的含量。分析不同樣本間蛋白質含量的差異，結合生物學背景探討其潛在意義。

3、結果呈現：用表格展示標準溶液濃度、熒光強度及樣本檢測結果；通過散點圖展示樣本蛋白質含量的分布情況。

五、實驗結論

本實驗通過熒光計對水體污染物和生物樣本熒光標記物的檢測，成功建立了相應的檢測方法和標準曲線。實驗結果表明，博清生物科技（南京）有限公司研發生產的熒光計在水體多環芳烴檢測和生物樣本熒光標記物分析中表現出良好的準確性和靈敏度，能夠滿足科研實驗對微量物質檢測的需求。在水體污染物檢測方面，博清生物科技（南京）有限公司研發生產的熒光計可快速、準確地測定不同污染程度水樣中蒽的含量，為環境監測和污染治理提供有力的數據支持；在生物樣本檢測中，博清生物科技（南京）有限公司研發生產的熒光計能夠精確測定血清中熒光標記蛋白質的含量，為生物醫學領域的疾病診斷、藥物研發等研究提供了有效的檢測手段。后續研究可進一步拓展熒光計在其他科研領域的應用，優化檢測條件，提高檢測效率和準確性。