一、禽流感流行現狀與防控需求

禽流感是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一類禽類傳染病的總稱，根據病毒致病性可分為高致病性、低致病性和非致病性三類。其中高致病性禽流感發病急、傳播快，病死率可達100%，一旦暴發會導致禽類大規模死亡，給養殖業帶來巨額經濟損失。同時，H5N1、H7N9等亞型禽流感病毒可突破種間屏障感染人類，引發重癥肺炎甚至死亡，構成嚴重的公共衛生威脅。因此，建立快速、準確、高效的診斷技術體系，實現禽流感的早期發現、精準防控，對保障養殖業安全和公共衛生安全具有重要意義。

二、傳統禽流感診斷方法的局限

目前禽流感診斷方法主要包括病毒分離培養、反轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）、血清學檢測等。病毒分離培養作為金標準，具有特異性強的優勢，但操作復雜、培養周期長（需3-7天），且對實驗室生物安全等級要求高，難以滿足現場快速診斷需求；RT-PCR技術靈敏度高、特異性好，但依賴精密的核酸提取與擴增設備，試劑成本較高，對操作人員專業技能要求嚴格，在基層實驗室推廣受限；傳統血清學方法如血凝抑制試驗（HI）操作繁瑣，主觀性較強，檢測效率低，無法適應大規模樣本篩查。

三、材料與方法

（一）實驗材料

1、樣本來源：收集近年來自全國5個禽類養殖主產區的臨床樣本共320份，包括雞血清210份、鴨血清70份、鵝血清40份，所有樣本均經冷鏈運輸至實驗室，-20℃冷凍保存備用。

2、試劑：禽流感病毒（H5+H7亞型）抗體檢測ELISA試劑盒，包含包被抗原板、酶標二抗、陽性對照血清、陰性對照血清、底物溶液 A/B、終止液等；磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）、吐溫-20等均為分析純試劑。

3、儀器：博清生物酶標儀；恒溫水浴鍋；移液器；離心機。

（二）實驗方法

1、樣本預處理：將冷凍保存的血清樣本室溫解凍后，3000r/min離心5min，取上清液備用，避免溶血樣本納入檢測。

2、ELISA檢測操作：嚴格按照試劑盒說明書及博清生物酶標儀操作指南進行實驗。①加樣：將陽性對照、陰性對照各設3個重復孔，待檢樣本設2個重復孔，每孔加入100μL 對應血清樣本，37℃孵育60min；②洗滌：棄去孔內液體，用含0.05% 吐溫-20的PBS緩沖液洗滌5次，每次浸泡30s，拍干；③加酶標二抗：每孔加入100μL 酶標二抗，37℃孵育30min，重復洗滌步驟；④顯色：每孔依次加入50μL底物溶液A和B，避光37℃孵育15min；⑤終止：每孔加入50μL終止液，輕輕振蕩混勻。

3、儀器檢測參數設置：使用博清生物酶標儀。通過儀器自帶數據分析軟件，以（待檢樣本OD值/陽性對照OD值）×100%計算S/P值，S/P≥0.4判定為陽性，S/P<0.4判定為陰性。

4、對比實驗：采用病毒分離培養法（金標準）和RT-PCR法對所有樣本進行平行檢測，以金標準檢測結果為參照，計算博清生物酶標儀的診斷性能指標。

5、重復性試驗：選取10份陽性樣本和10份陰性樣本，在同一批次內連續檢測3次（批內重復），并在不同日期檢測3次（批間重復），計算各樣本OD值的變異系數（CV），評估儀器檢測重復性。

（三）數據處理

采用SPSS 26.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（x±s）表示，變異系數計算采用 CV=（標準差/均數）×100%。以P<0.05為差異具有統計學意義。

四、結果

（一）博清生物酶標儀檢測結果與金標準的一致性

320份臨床樣本經病毒分離培養法檢測，陽性樣本122份，陰性樣本198份。博清生物酶標儀檢測出陽性樣本120份，陰性樣本197份，其中真陽性120份，真陰性195份，假陽性3份，假陰性2份。診斷靈敏度為98.3%（120/122），特異性為97.8%（195/198），陽性預測值為97.6%（120/123），陰性預測值為98.5%（195/198），總符合率為98.0%（315/320）。Kappa一致性檢驗顯示，Kappa值=0.958（P<0.001），表明博清生物酶標儀檢測結果與金標準具有極高的一致性。

（二）檢測靈敏度與特異性分析

對10份梯度稀釋的禽流感病毒陽性血清（稀釋度1:100至1:12800）進行檢測，博清生物酶標儀可穩定檢出最低稀釋度為1:6400的陽性樣本，而傳統HI試驗僅能檢出1:1600及以上稀釋度樣本，表明其靈敏度顯著高于傳統血清學方法。特異性試驗中，采用新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒、鴨瘟病毒等8種常見禽類疫病陽性血清進行檢測，博清生物酶標儀均檢出為陰性，無交叉反應，特異性達100%。

（三）重復性試驗結果

批內重復性試驗中，20份樣本OD值的CV范圍為1.2%-2.8%，平均CV為1.9%；批間重復性試驗中，CV范圍為2.5%-4.6%，平均CV為3.7%，均低于ELISA檢測技術規范中CV≤5% 的要求，表明博清生物酶標儀檢測結果具有良好的穩定性與重復性。

五、討論

（一）博清生物酶標儀的核心性能優勢

本研究結果表明，博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀在禽流感診斷中表現出優異的綜合性能。其高靈敏度得益于儀器采用的8通道光纖檢測系統，可實現對微弱光信號的精準捕捉，結合雙波長檢測模式有效剔除背景干擾，使得低濃度抗體樣本得以準確檢出，這對于禽流感早期感染的發現及疫情預警具有重要意義。在特異性方面，儀器通過優化光學系統設計及信號處理算法，有效避免了交叉反應導致的誤診，為診斷結果的可靠性提供了保障。

重復性作為衡量檢測設備穩定性的關鍵指標，博清生物酶標儀在批內及批間試驗中均表現出較低的變異系數，這與其采用的高精度加樣控制技術及恒溫孵育系統密切相關。儀器自帶的智能化數據分析軟件可自動完成數據讀取、計算及結果判定，減少了人工操作誤差，進一步提升了檢測結果的一致性。此外，該儀器操作界面簡潔直觀，無需專業技術人員即可快速掌握，且檢測成本顯著低于RT-PCR法，更適合基層實驗室及大規模流行病學調查場景的應用。

（二）與同類診斷技術的對比價值

相較于傳統診斷方法，博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀結合ELISA技術的診斷方案在效率、成本及適用性方面具有明顯優勢。病毒分離培養法雖為金標準，但操作復雜且周期長，無法滿足疫情應急處置的快速響應需求；RT-PCR技術雖靈敏度高，但依賴昂貴的儀器設備及試劑，且對實驗室環境及操作人員技能要求嚴格，難以在基層防疫機構普及。博清生物酶標儀實現了“高性能-低成本-易操作”的平衡，單次檢測成本僅為RT-PCR法的1/3，且檢測周期縮短近40%，能夠有效填補基層禽流感診斷技術的短板。

與同類酶標儀產品相比，博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀在光學精度及智能化程度上表現突出。其波長精度達±2nm，吸光度分辨率為0.001A，優于行業平均水平（波長精度±3nm，分辨率0.005A），確保了檢測結果的準確性；自帶的樣本信息管理系統可實現檢測數據的自動存儲、導出及追溯，符合實驗室信息化管理需求。此外，儀器采用的長壽命光源系統（使用壽命≥10000小時）降低了后期維護成本，進一步提升了產品的性價比。

（三）實際應用中的優化方向與前景

在實際應用中，檢測結果的準確性除依賴儀器性能外，還與試劑盒質量、樣本處理流程密切相關。因此，建議在使用博清生物酶標儀進行禽流感診斷時，選擇經過國家獸藥GMP認證的ELISA試劑盒，并嚴格按照標準操作流程進行樣本預處理及檢測操作，以確保結果可靠。對于復雜基質樣本（如嚴重溶血或脂血血清），可通過儀器軟件的背景校正功能進一步降低干擾，提升檢測準確性。

隨著禽流感防控工作的常態化推進，對快速診斷技術的需求將持續增長。博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀可進一步拓展應用場景，如結合多重ELISA技術實現多亞型禽流感病毒的同步檢測，或與便攜式檢測設備聯用開發現場快速診斷系統。未來，通過整合人工智能算法，有望實現檢測數據的實時分析及疫情趨勢預測，為禽流感精準防控提供更有力的技術支撐。

本研究通過系統的性能評估證實，博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀在禽流感診斷中具有靈敏度高、特異性強、重復性好、檢測效率高的特點，與金標準檢測結果具有極高的一致性，且操作簡便、成本適中，能夠滿足基層實驗室臨床診斷、流行病學調查及大規模樣本篩查的需求。該儀器的推廣應用將有效提升我國禽流感疫情的早期發現能力和應急處置效率，為養殖業安全及公共衛生安全提供重要技術保障。