隨著轉基因技術在農業領域的廣泛應用，轉基因食品的安全性與標識管理已成為全球食品安全監管的核心議題之一。我國《食品安全國家標準 預包裝食品標簽通則》明確要求，含轉基因成分的食品需依法標注，而準確篩查食品中的轉基因成分是落實該要求的關鍵前提。

熒光定量PCR技術因具有特異性強、靈敏度高、定量準確等優勢，已成為轉基因成分檢測的主流技術，其性能直接依賴于檢測儀器的穩定性與精準度。博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光定量PCR儀作為國產自主研發儀器，具備96孔快速檢測模塊、實時熒光采集系統及內置質控軟件，但目前針對其在食品安全檢疫場景下的系統驗證研究尚未見報道。本研究通過標準品與實際樣品檢測，全面驗證該儀器的應用可行性，為國產儀器在食品安全監管中的推廣提供數據支持。

一、材料與方法

（一）實驗材料

1、儀器：博清生物熒光定量PCR儀；對照儀器為國家標準驗證儀器；核酸提取儀。

2、試劑：轉基因成分檢測試劑盒（含CaMV35S啟動子、NOS終止子引物探針，大豆Lectin、玉米ADH1內參基因引物探針），；核酸提取試劑盒；無酶水。

3、樣品：

標準品：轉基因大豆質粒標準品（濃度梯度：101?~101拷貝/μL）、轉基因玉米質粒標準品（同濃度梯度）；

實際樣品：20份作物樣品（10份大豆、10份玉米），采集自本地農貿市場，其中5份為已知轉基因陽性樣品（用于驗證）。

（二）實驗方法

1、核酸提取

取200mg樣品粉末，采用核酸提取試劑盒按說明書操作，提取基因組DNA；用超微量分光光度計檢測DNA純度（A260/A280 需在1.8~2.0之間）與濃度，調整至50ng/μL備用。

2、PCR 反應體系與程序

反應體系（總體積 20μL）：2×熒光定量PCR Mix 10μL，上游引物（10μmol/L）0.8μL，下游引物（10μmol/L）0.8μL，探針（10μmol/L）0.4μL，模板DNA 2μL，無酶水6μL。

反應程序：95℃預變性30s；95℃變性5s，60℃退火延伸 30s（采集熒光信號），共40個循環；溶解曲線分析：95℃15s，60℃1min，95℃15s。

3、性能評價指標

靈敏度：對101?~101 拷貝/μL的質粒標準品進行梯度檢測，記錄最低可檢出的拷貝數；

特異性：檢測非轉基因大豆、非轉基因玉米、水稻、小麥樣品，驗證是否出現非特異性擴增；

重復性：選取103拷貝/μL的標準品及2份陽性實際樣品，各重復檢測3次，計算Ct值的CV；

一致性：用博清生物與對照儀器同時檢測20份實際樣品，對比檢測結果的符合率。

二、結果與分析

（一）靈敏度檢測結果

博清生物熒光定量PCR儀對轉基因大豆、玉米標準品的檢測結果顯示，當標準品濃度降至10拷貝/μL 時，仍可穩定檢出熒光信號（Ct值≤38），且溶解曲線呈單一峰值（Tm值約68℃），無非特異性擴增。該靈敏度滿足我國及歐盟對轉基因成分“最低檢出限≤0.1%”的監管要求。

（二）特異性檢測結果

對非轉基因大豆、玉米及水稻、小麥樣品的檢測中，博清生物熒光定量PCR儀僅在轉基因陽性標準品中出現特異性擴增，其余樣品均無熒光信號（Ct值＞40），表明該儀器對轉基因核心元件的檢測無交叉反應，特異性良好。

（三）重復性檢測結果

103拷貝/μL標準品及2份陽性實際樣品的3次重復檢測中，Ct值的CV分別為1.2%、1.5%、1.8%（均＜2%），表明博清生物熒光定量PCR儀的檢測結果穩定性滿足科研與檢疫的重復性要求。

（四）與標準儀器的一致性對比

20份實際樣品的檢測結果顯示，博清生物熒光定量PCR儀與對照儀器的陽性檢出結果完全一致（5份陽性，15份陰性），符合率達100%，證明該儀器的檢測準確性與國際主流儀器相當，可替代進口儀器用于日常檢疫工作。

三、討論

本研究從靈敏度、特異性、重復性及一致性四個維度，驗證了博清生物熒光定量PCR儀在轉基因成分篩查中的應用性能。結果表明，該儀器具有以下優勢：

（一）高靈敏度：10拷貝/μL的檢出限可覆蓋低含量轉基因成分的篩查需求，避免因檢出限不足導致的漏判；

（二）強特異性：對非目標作物無交叉反應，減少假陽性結果對監管決策的干擾；

（三）高穩定性：CV≤1.8%的重復性表現，保證了批量樣品檢測的結果可靠性；

（四）高性價比：作為國產儀器，其檢測性能與進口儀器相當，但采購與維護成本更低，更適合基層檢疫機構推廣。

需注意的是，本研究僅針對CaMV35S、NOS等常見轉基因元件，后續可進一步擴展對CP4-EPSPS、PAT等特異性基因的檢測驗證，以覆蓋更多轉基因作物類型。此外，結合博清生物儀器的內置質控軟件，可實現檢測數據的自動記錄與溯源，進一步提升檢疫工作的效率與規范性。

博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光定量PCR儀在食品安全檢疫的轉基因成分篩查中，表現出優異的靈敏度、特異性與重復性，且與國家標準驗證儀器的檢測結果完全一致。該儀器可滿足我國食品安全監管對轉基因成分檢測的技術要求，為國產熒光定量PCR儀在食品檢疫領域的應用提供了可靠的實驗依據，具備廣闊的推廣前景。