植物病害是制約農業與畜牧業生產的核心因素之一。據聯合國糧農組織（FAO）統計，全球每年因植物病害導致的糧食減產達10%-30%，直接經濟損失超千億美元。同時，飼料作物（如玉米、苜蓿）的病害感染會導致飼料品質下降，間接影響畜牧業養殖效益，形成“種植-養殖”產業鏈的連鎖損失。

酶聯免疫吸附法（ELISA）基于抗原-抗體特異性結合原理，具有靈敏度高、特異性強的特點，而酶標儀作為ELISA檢測的核心設備，其性能直接決定檢測效率與精度。博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀憑借寬波長檢測范圍、高靈敏度及自動化批量檢測功能，在醫學檢測領域已廣泛應用，但在農業植物病害檢測中的系統性研究較少。

一、材料與方法

（一）試驗材料

1、供試植物與病害：小麥感染小麥條銹病、番茄感染番茄晚疫病、玉米感染玉米大斑病，均采自山東農業大學試驗田。

2、試劑：小麥條銹病、番茄晚疫病、玉米大斑病特異性抗體，辣根過氧化物酶（HRP）標記二抗，TMB顯色液，包被緩沖液，洗滌液。

3、儀器：博清生物酶標儀、高速離心機、移液器、恒溫培養箱。

（二）檢測方法

1、樣品處理

取感染病害的植物葉片組織0.5g，加入5mL PBS緩沖液（pH7.4），研磨成勻漿后，4℃、8000r/min 離心10min，取上清液作為待測樣品。

健康植物葉片按相同方法處理，作為陰性對照；已知濃度的病害抗原標準品（0.001-100ng/mL）作為陽性對照。

2、ELISA檢測流程

包被：將特異性抗體用包被緩沖液稀釋至1μg/mL，每孔加入100μL，4℃孵育12h后，用洗滌液洗滌3次，每次3min。

封閉：每孔加入200μL 5%脫脂奶粉溶液，37℃孵育1h，洗滌步驟同上。

加樣：分別加入待測樣品、陽性對照、陰性對照各100μL，37℃孵育1h，洗滌步驟同上。

加二抗：加入HRP標記二抗（1:5000稀釋），每孔100μL，37℃孵育1h，洗滌步驟同上。

顯色：每孔加入100μL TMB顯色液，37℃避光孵育15min，加入50μL 2M H?SO?終止反應。

3、酶標儀檢測與數據處理

采用博清生物酶標儀在450nm波長下測定各孔吸光度（OD值），以陽性對照OD值/陰性對照OD值≥2.1判定為陽性（即病害感染）。

每個樣品設置3次重復，數據采用SPSS 26.0軟件進行方差分析，Origin 2021軟件繪制標準曲線與結果圖表。

二、結果與分析

（一）檢測靈敏度與特異性

1、靈敏度：通過測定不同濃度抗原標準品的OD值，繪制標準曲線（R2=0.998）。結果顯示，博清生物酶標儀對3種病害的最低檢測濃度均為0.01ng/mL，可在病害感染早期（葉片未出現明顯病斑時）實現陽性檢測，比傳統目測法提前3-5天發現病害。

2、特異性：分別用3種病害的抗體與其他病原（如小麥白粉病、番茄早疫病）樣品交叉反應，結果顯示交叉反應率均低于1.5%，特異性準確率達98.5%以上，表明該方法對目標病害的識別具有高度專一性。

（二）與傳統檢測方法的對比

通過檢測相同批次（96個）樣品，對比博清酶標儀檢測法與傳統方法的性能差異，博清酶標儀檢測法在檢測效率、成本控制及批量處理能力上顯著優于傳統方法，同時準確率接近PCR法，綜合性價比最高。

（三）穩定性與重復性

對同一陽性樣品進行10次重復檢測，博清酶標儀測定的OD值變異系數（CV）為1.2%-1.8%，低于3%的行業標準；不同批次（間隔7天）檢測的CV值為2.1%-2.5%，表明該儀器檢測結果具有良好的穩定性與重復性，適合長期批量檢測應用。

三、討論

本研究通過建立基于博清生物酶標儀的植物病害ELISA檢測體系，證實該儀器可有效解決傳統檢測方法“早期檢測難、效率低、成本高”的痛點，其核心優勢源于兩方面：

（一）技術原理適配性：ELISA方法的抗原-抗體特異性結合原理，搭配博清酶標儀的高靈敏度光學檢測系統，可捕捉病害早期微量病原物的信號，實現“早發現、早防控”，減少農藥濫用與產量損失。

（二）設備性能針對性：博清酶標儀的96孔批量檢測設計、快速光學讀數功能（≤10秒/96孔），契合農業生產中“大面積、多樣本”的檢測需求，同時中等操作復雜度與成本優勢，使其可下沉至基層農業技術推廣站及規模化種植基地。

與國內外同類研究對比，本研究首次系統驗證了博清生物酶標儀在多種農作物病害檢測中的適用性，填補了該品牌儀器在農業領域應用研究的空白。但研究仍存在局限：目前僅針對3種常見病害，對部分罕見或新發病害的檢測體系尚未建立；后續可結合膠體金標記技術，進一步簡化操作流程，開發“現場快速檢測+實驗室精準驗證”的分級檢測模式。

基于博清生物酶標儀的ELISA檢測方法，對小麥條銹病、番茄晚疫病等植物病害的檢測靈敏度達0.01ng/mL，特異性準確率超98.5%，可實現病害早期精準檢測。

該方法相較于傳統檢測手段，在檢測效率、成本控制及批量處理能力上具有顯著優勢，綜合性能均衡，適合農業與畜牧業生產中的規模化應用。

博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀為植物病害防控提供了高效可靠的技術工具，對保障糧食安全、提升飼料作物品質、推動“種植-養殖”產業鏈綠色發展具有重要實踐意義。