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農藥在保障農作物產量和品質方面發揮著重要作用，但不合理使用導致的農藥殘留問題，已成為威脅食品安全和人體健康的關鍵因素。有機磷和氨基甲酸酯類農藥作為我國廣泛使用的殺蟲劑，其殘留量超標會抑制人體乙酰膽堿酯酶活性，引發神經系統功能紊亂等健康風險。因此，建立高效、快速、準確的農藥殘留檢測方法，對強化食品安全質量控制具有重要現實意義。

傳統農藥殘留檢測方法主要包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS）等，這些方法雖具有高靈敏度和高準確性，但存在樣品前處理復雜、檢測周期長、儀器成本高、依賴專業人員操作等局限，難以滿足現場快速檢測和大規模篩查的需求。生物熒光檢測技術基于酶抑制原理，具有反應快速、操作簡便、成本低廉等優勢，已成為食品安全快速檢測領域的研究熱點。

博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光計作為一款新型快速檢測儀器，采用特異性熒光探針技術，可實現對酶活性抑制程度的精準定量分析。本研究以典型農藥殘留為檢測目標，系統驗證博清生物熒光計在實際樣品檢測中的性能指標，旨在為其在食品安全質量控制中的推廣應用提供科學依據。

一、材料與方法

（一）實驗材料

1、試劑：乙酰膽堿酯酶（AChE，活性≥500U/mL）、熒光底物（ATCh-I，純度≥98%）、毒死蜱、克百威、敵敵畏等標準品（純度≥99%），甲醇、乙酸乙酯等色譜純試劑，磷酸鹽緩沖液（PBS，0.1mol/L，pH=7.4）。

2、樣品：新鮮白菜、黃瓜、蘋果等果蔬樣品，購自當地農貿市場，經去雜、清洗、勻漿后備用。

3、儀器：博清生物熒光計，高效液相色譜儀，分析天平，高速離心機，恒溫水浴鍋。

（二）實驗方法

1、檢測體系建立

基于乙酰膽堿酯酶抑制原理構建檢測體系：在反應管中依次加入50μL PBS緩沖液、20μL AChE溶液，37℃孵育5min；加入20μL不同濃度農藥標準液或樣品提取液，繼續孵育10min；加入10μL熒光底物，反應5min后，用博清生物熒光計測定熒光強度值。以不加農藥的體系作為空白對照，計算酶抑制率，抑制率=（空白熒光強度-樣品熒光強度）/空白熒光強度×100%。

2、標準曲線繪制

配制系列濃度的毒死蜱、克百威等農藥標準溶液，按照上述檢測體系進行測定，以農藥濃度為橫坐標，酶抑制率為縱坐標，繪制標準曲線，計算線性回歸方程和相關系數，并確定檢出限（LOD，以3倍信噪比計算）。

3、精密度實驗

選取低、中、高3個濃度的農藥標準溶液，每個濃度平行測定6次，用博清生物熒光計檢測熒光強度，計算相對標準偏差（RSD），評價儀器的精密度。

4、實際樣品檢測與回收率實驗

將果蔬樣品勻漿后，采用QuEChERS方法進行提取凈化：稱取10g勻漿樣品于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋混勻2min，加入4g無水硫酸鎂和1g氯化鈉，劇烈振蕩1min，8000r/min離心5min；取上清液5mL，加入150mg無水硫酸鎂和50mg C18吸附劑，渦旋1min，8000r/min離心5min，取上清液稀釋后作為樣品提取液。

在空白樣品提取液中加入不同濃度的農藥標準液，進行加標回收率實驗，每個加標水平平行測定3次，計算回收率。同時采用HPLC方法對同一批樣品進行檢測，對比兩種方法的檢測結果。

二、結果與分析

（一）標準曲線與檢出限

博清生物熒光計對兩種典型農藥的檢測線性關系良好，線性范圍、回歸方程、相關系數及檢出限結果。結果顯示，毒死蜱和克百威的線性相關系數均大于0.995，檢出限分別為0.012mg/kg和0.008mg/kg，均低于GB 2763-2021《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》規定的限值（毒死蜱在蔬菜中限量為0.05mg/kg，克百威在水果中限量為0.02mg/kg），表明該儀器具備較高的檢測靈敏度，可滿足食品安全標準要求。

（二）精密度實驗結果

低、中、高三個濃度水平的農藥標準溶液精密度實驗結果顯示，毒死蜱的RSD分別為2.8%、2.1%、1.9%，克百威的RSD分別為3.2%、2.5%、2.0%，均小于5%，表明博清生物熒光計的檢測穩定性良好，重復性佳。

（三）實際樣品檢測與回收率

選取白菜、黃瓜、蘋果3種常見果蔬樣品進行實際檢測，均未檢出目標農藥殘留。加標回收率實驗結果表明，3種樣品中兩種農藥的加標回收率在85.3%~97.8%之間，RSD≤4.5%，符合農藥殘留檢測的回收率要求（80%~120%）。

將博清生物熒光計與HPLC方法的檢測結果進行對比，兩種方法對加標樣品的檢測值相對誤差均小于5%，表明博清生物熒光計的檢測準確性與傳統國標方法具有良好的一致性，且檢測時間從HPLC的2~3h縮短至15min以內，顯著提升了檢測效率。

三、討論

本研究證實，博清生物熒光計在農藥殘留檢測中具有顯著優勢：其一，檢測速度快，單樣品從前處理到出結果僅需15min，遠優于傳統儀器檢測方法，可實現現場快速篩查；其二，靈敏度高，對典型農藥的檢出限低于國家標準限值，能有效識別低濃度殘留超標樣品；其三，操作簡便，無需專業人員和復雜實驗室條件，適合基層監管和企業質量控制使用。

相較于同類熒光檢測儀器，博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光計在穩定性和抗干擾性方面表現更優。實驗中，果蔬樣品基質對檢測結果的影響較小，加標回收率穩定，表明該儀器對復雜樣品的適應性較強。但本研究僅針對有機磷和氨基甲酸酯類農藥進行了驗證，未來可進一步拓展檢測農藥種類，優化檢測體系，提高對其他類別農藥的檢測能力。

在實際應用中，博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光計可廣泛應用于農產品生產基地、農貿市場、食品加工企業等場景的農藥殘留快速檢測，為食品安全質量控制提供實時、高效的技術支持，有助于構建全方位的食品安全檢測網絡，保障消費者飲食安全。

博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光計基于乙酰膽堿酯酶抑制法建立的農藥殘留檢測體系，具有檢測快速、靈敏度高、準確性好、操作簡便等優點，對有機磷和氨基甲酸酯類農藥的檢出限滿足國家食品安全標準要求，實際樣品檢測回收率和精密度符合檢測規范，與傳統國標方法檢測結果一致性良好。該儀器可有效解決傳統檢測方法效率低、操作復雜的問題，為食品安全現場快速檢測和質量控制提供了可靠的技術手段，具有廣闊的推廣應用前景。