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診斷試劑作為生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的核心細(xì)分領(lǐng)域，在傳染病防控、臨床疾病診斷、食品安全檢測等領(lǐng)域發(fā)揮不可替代作用。核酸提取是診斷試劑生產(chǎn)的首要核心步驟——無論是核酸擴(kuò)增（PCR）試劑、基因測序試劑，還是核酸等溫擴(kuò)增試劑，其核心原料（目標(biāo)核酸模板）的提取質(zhì)量直接影響試劑的檢測性能：低純度核酸中的蛋白、多糖等雜質(zhì)會抑制擴(kuò)增反應(yīng)，而低效率提取會導(dǎo)致試劑靈敏度不足，批間差異則會降低試劑臨床應(yīng)用的可靠性。

傳統(tǒng)核酸提取方法（如酚-氯仿法、離心柱法）存在操作繁瑣、耗時久、通量低、人為誤差大等缺陷，難以適應(yīng)診斷試劑規(guī)?；a(chǎn)的需求。自動化核酸提取儀的出現(xiàn)實現(xiàn)了提取流程的標(biāo)準(zhǔn)化、高通量化，成為診斷試劑生產(chǎn)工藝升級的關(guān)鍵設(shè)備。博清生物科技（南京）有限公司作為國內(nèi)生物技術(shù)設(shè)備領(lǐng)域的創(chuàng)新企業(yè)，其研發(fā)的核酸提取儀基于磁珠法原理，整合高通量通道設(shè)計、智能溫控系統(tǒng)及自動化液體處理技術(shù)，針對診斷試劑生產(chǎn)的工業(yè)化需求進(jìn)行優(yōu)化。

一、材料與方法

（一）實驗儀器

博清生物核酸提取儀；實時熒光定量PCR儀；核酸蛋白檢測儀；高速冷凍離心機(jī)。

（二）實驗材料與試劑

新冠病毒假病毒顆粒（濃度1×10?copies/mL，國家衛(wèi)健委臨床檢驗中心）；大腸埃希菌（ATCC 25922）、金黃色葡萄球菌（ATCC 29213）標(biāo)準(zhǔn)菌株；臨床血清樣本（100例）；磁珠法核酸提取試劑盒（病毒型、細(xì)菌型、全血型）；新冠病毒核酸檢測試劑盒。

（三）實驗設(shè)計

1、提取效率與純度評估

分別以新冠病毒假病毒顆粒、大腸埃希菌菌液（1×10?CFU/mL）、臨床血清樣本為研究對象，采用博清生物提取儀進(jìn)行核酸提取，每個樣本設(shè)置3個平行重復(fù)，共3批實驗。通過核酸蛋白檢測儀檢測提取核酸的A260/A280比值（評估純度）及A260值（換算濃度，評估效率）；同時以傳統(tǒng)離心柱法為對照，比較兩種方法的提取效果。

2、重復(fù)性評估

選取新冠病毒假病毒顆粒（濃度1×10?、1×10?、1×10?copies/mL）3個梯度樣本，采用核酸提取儀進(jìn)行20次批內(nèi)提取、5批批間提?。ú煌掌?、不同操作人員），通過實時熒光定量PCR檢測提取核酸的Ct值，計算變異系數(shù)（CV）。

3、診斷試劑生產(chǎn)應(yīng)用驗證

將核酸提取儀整合入新冠病毒核酸檢測試劑盒生產(chǎn)流程，以1×10?copies/mL的假病毒顆粒為原料，批量提取核酸作為陽性參考品原料，生產(chǎn)3批試劑盒（每批1000人份）。依據(jù)《新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒技術(shù)審查指導(dǎo)原則》，檢測試劑盒的陽性符合率、陰性符合率、批間差異及穩(wěn)定性。

二、結(jié)果

（一）提取效率與純度

博清生物核酸提取儀與傳統(tǒng)離心柱法的提取性能對比結(jié)果顯示：兩種儀器提取病毒核酸、細(xì)菌核酸及血清樣本核酸的A260/A280比值均在1.8-2.0范圍內(nèi)，但博清生物核酸提取儀提取核酸濃度平均高出離心柱法12.3%-18.7%；且博清儀器單批提取時間較離心柱法（120縮短75%。

（二）重復(fù)性

批內(nèi)及批間重復(fù)性實驗結(jié)果顯示：博清生物核酸提取儀對不同濃度假病毒樣本的批內(nèi)Ct值CV為1.2%-2.3%，批間Ct值CV為2.1%-3.5%，均顯著低于離心柱法（批內(nèi)CV3.8%-5.2%，批間CV4.9%-6.7%），表明其提取過程穩(wěn)定性優(yōu)異，受人為操作及環(huán)境因素影響小。

（三）診斷試劑生產(chǎn)應(yīng)用效果

將博清生物核酸提取儀應(yīng)用于新冠病毒核酸檢測試劑盒生產(chǎn)后，3批試劑盒的質(zhì)量檢測結(jié)果顯示：陽性符合率均為99.2%（124/125），陰性符合率100%（125/125）；批間Ct值差異＜0.5，穩(wěn)定性實驗（4℃存放6個月）顯示試劑性能無顯著下降，各項指標(biāo)均符合《新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒技術(shù)審查指導(dǎo)原則》要求。與傳統(tǒng)生產(chǎn)流程相比，采用博清提取儀后，試劑盒生產(chǎn)效率提升60%，人為誤差導(dǎo)致的不合格率從3.2%降至0.8%。

三、討論

診斷試劑生產(chǎn)的核心訴求是“高效、穩(wěn)定、標(biāo)準(zhǔn)化”，而核酸提取環(huán)節(jié)的工藝水平直接決定這三大訴求的實現(xiàn)。博清生物核酸提取儀之所以能顯著提升診斷試劑生產(chǎn)性能，其技術(shù)優(yōu)勢主要體現(xiàn)在三方面：一是采用磁珠法特異性結(jié)合技術(shù)，通過優(yōu)化磁珠表面修飾工藝，提高核酸結(jié)合效率，降低雜質(zhì)殘留，從而提升提取核酸純度；二是高通量自動化設(shè)計，16通道并行操作可滿足不同規(guī)模生產(chǎn)需求，自動化液體處理系統(tǒng)避免人為操作差異，保障批間一致性；三是智能溫控與流程優(yōu)化，將裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫等步驟的溫度與時間參數(shù)進(jìn)行工業(yè)化適配，縮短提取周期的同時保證提取效率。

在傳染病診斷試劑生產(chǎn)中，如新冠病毒核酸檢測試劑盒，陽性參考品的核酸質(zhì)量直接影響試劑校準(zhǔn)準(zhǔn)確性。本研究中，博清提取儀提取的核酸作為參考品原料，使試劑盒陽性符合率穩(wěn)定在99%以上，批間差異顯著降低，證明其可有效保障試劑質(zhì)量穩(wěn)定性。此外，該儀器適配病毒、細(xì)菌、全血、組織等多種樣本類型的提取需求，可靈活應(yīng)用于呼吸道傳染病、消化道傳染病、遺傳病等各類診斷試劑的生產(chǎn)，具有廣泛的產(chǎn)業(yè)適用性。

與國外同類儀器相比，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的核酸提取儀在性能相當(dāng)?shù)那疤嵯拢哂懈叩男詢r比和更靈活的本土化服務(wù)，可降低國內(nèi)診斷試劑企業(yè)的生產(chǎn)成本，提升產(chǎn)業(yè)競爭力。未來，隨著生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)向“精準(zhǔn)化、快速化”發(fā)展，核酸提取儀需進(jìn)一步優(yōu)化提取通量、縮短提取時間，并與下游擴(kuò)增、檢測設(shè)備實現(xiàn)一體化整合，博清生物科技（南京）有限公司可基于現(xiàn)有技術(shù)平臺，開展多模塊集成研發(fā)，為診斷試劑生產(chǎn)提供更完整的解決方案。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的核酸提取儀在診斷試劑生產(chǎn)中的應(yīng)用顯示，其具有提取效率高、純度優(yōu)、重復(fù)性好、自動化程度高的特點，可顯著提升診斷試劑生產(chǎn)效率、降低人為誤差、保障試劑質(zhì)量穩(wěn)定性。該儀器能滿足各類診斷試劑規(guī)?；?biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的需求，對推動生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)中診斷試劑領(lǐng)域的工藝升級與質(zhì)量提升具有重要意義，具備廣闊的市場應(yīng)用前景。