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感染性疾病作為全球公共衛生的重大挑戰，其導致的死亡占全球總死亡人數的1/3以上，嚴重威脅人類健康與公共衛生安全。病毒載量作為評估病原體復制活性、疾病進展程度及治療效果的核心指標，在感染性疾病診療中具有不可替代的作用，例如HIV病毒載量監測可直接指導抗病毒治療方案調整，HBV病毒載量動態變化與肝硬化、肝癌發生風險密切相關。

傳統檢測方法如病原體培養、血清學檢測等存在耗時久、靈敏度低、難以定量等局限性，無法滿足現代醫學“早診斷、準治療、快防控”的需求。熒光定量PCR（qPCR）技術通過實時監測核酸擴增過程中的熒光信號變化，實現了病原體核酸的定性與定量分析，具有靈敏度高、特異性強、檢測快速等優勢，已成為臨床病毒載量監測的“黃金標準”。博清生物科技（南京）有限公司自主研發的BOD-16PE熒光定量PCR儀，融合了實時動態精準溫控技術與多通道熒光檢測系統，針對移動檢測、現場篩查等場景進行優化設計，兼具高通量與便攜性特點。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑

試驗儀器：博清生物熒光定量PCR儀（型號BOD-16PE），配備7寸觸控屏、4 色熒光檢測通道，16孔反應模塊；對照儀器為某品牌熒光定量PCR儀。

試驗試劑：HBV、SARS-CoV-2、HIV核酸檢測試劑盒（含引物、TaqMan探針、反轉錄酶、Taq酶等）；病毒核酸提取試劑盒（磁珠法）；系列濃度病毒核酸標準品（102~10? copies/μL）。

（二）試驗方法

1、檢測體系建立

按照試劑盒說明書配置25μL PCR反應體系：2×qPCR Mix 12.5μL，上下游引物（10μmol/L）各0.5μL，熒光探針（10μmol/L）0.3μL，模板核酸5μL，無酶純水補至25μL。反應程序設置：逆轉錄（針對RNA病毒）42℃ 15min，預變性95℃ 3min；95℃ 10s，60℃ 30s，40個循環，每個循環結束后收集熒光信號。

2、靈敏度檢測

將HBV、SARS-CoV-2、HIV標準品分別進行10倍梯度稀釋，濃度范圍為101~10? copies/μL，每個濃度設置3個復孔，同時設置陰性對照。采用博清生物熒光定量PCR儀進行檢測，以3個復孔均能檢出熒光信號且Ct值穩定的最低濃度為最低檢測限（LOD）。

3、線性范圍與擴增效率分析

取102~10?copies/μL的系列標準品，每個濃度設置3個復孔，進行qPCR檢測。以標準品濃度的對數為橫坐標，對應的Ct值為縱坐標，繪制標準曲線，計算相關系數（R2）；根據公式E=（10^(-1/slope)-1）×100%計算擴增效率，其中slope為標準曲線斜率。

4、重復性分析

選取中（10?copies/μL）、高（10?copies/μL）兩個濃度的標準品，每個濃度設置8個復孔，在同一批次內進行檢測（批內重復性）；連續5天重復檢測同一濃度標準品（批間重復性），計算Ct值的變異系數（CV），CV=（標準差/平均值）×100%。

二、結果

（一）靈敏度檢測結果

博清生物熒光定量PCR儀對HBV、SARS-CoV-2和HIV的最低檢測限分別為10copies/μL、15copies/μL和20copies/μL，均低于臨床常規檢測閾值（50copies/μL），能夠有效檢出低載量病毒樣本。

（二）線性范圍與擴增效率

在102~10?copies/μL濃度范圍內，三種病毒的標準曲線相關系數（R2）均≥0.995，擴增效率為90.2%~104.8%，符合臨床定量檢測要求。典型標準曲線顯示，Ct值與病毒核酸起始拷貝數的對數呈良好線性關系。

（三）重復性分析結果

批內重復性試驗中，中、高濃度標準品的Ct值變異系數（CV）均＜3%；批間重復性試驗中，CV值均＜5%，表明博清生物熒光定量PCR儀的檢測結果穩定性良好。

（四）臨床樣本驗證結果

120例臨床樣本中，博清生物熒光定量PCR儀與對照熒光定量PCR儀的檢測總符合率為96.7%（116/120），其中HBV樣本符合率 95.0%（38/40），SARS-CoV-2樣本符合率 97.5%（39/40），HIV樣本符合率97.5%（39/40）。Kappa檢驗結果顯示，兩種儀器的Kappa值為0.94，一致性極強。

三、討論

病毒載量監測是感染性疾病精準診療的核心環節，其檢測結果的準確性直接影響治療方案制定、療效評估及預后判斷。熒光定量PCR技術作為病毒載量檢測的主流方法，通過實時監測熒光信號與核酸擴增的同步關系，實現了對病毒核酸的精準定量，其性能優劣取決于儀器的溫控精度、光學檢測系統靈敏度及軟件數據處理能力。

本研究結果顯示，博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光定量PCR儀在病毒載量監測中表現出優異的性能：其一，靈敏度高，對HBV、SARS-CoV-2和HIV的最低檢測限分別低至10、15和20copies/μL，能夠有效捕捉感染初期或治療后低載量殘留病毒，為“功能性治愈”評估提供技術支持，這一性能與進口儀器相當，且滿足WHO對病毒載量檢測的靈敏度要求；其二，線性范圍寬（102~10?copies/μL），相關系數≥0.995，擴增效率穩定在90%~105%，確保了不同濃度病毒樣本檢測結果的準確性，尤其適用于病毒復制活躍期高載量樣本與治療后低載量樣本的動態監測；其三，重復性良好，批內與批間CV值均＜5%，符合臨床實驗室質量控制標準，避免了因檢測波動導致的診療誤判；其四，臨床一致性強，與進口儀器的總符合率達96.7%，Kappa值0.94，表明該儀器可有效替代進口設備用于臨床常規病毒載量檢測。

除核心檢測性能外，博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光定量PCR儀的設計優勢進一步拓展了其應用場景。該儀器采用7寸觸摸屏與菜單式導航界面，無需連接PC即可獨立操作，降低了對實驗室環境的要求；16孔反應模塊兼容八連排管與單管，兼顧了檢測通量與樣本靈活性；體量輕盈的便攜設計使其適用于移動實驗室、現場篩查等場景，在突發疫情防控中具有重要價值。此外，該儀器采用長壽命免維護LED光源與4色熒光檢測通道，可滿足多種病原體聯合檢測需求，如呼吸道多病毒同步篩查，符合現代醫學“一站式檢測”的發展趨勢。

當前，病毒載量檢測面臨的主要挑戰包括低拷貝樣本定量準確性、抑制物干擾及檢測時效性等問題。博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光定量PCR儀通過優化溫控系統（快速升溫速率與精準控溫精度）減少了非特異性擴增，結合TaqMan探針的特異性識別，有效降低了樣本抑制物的干擾；檢測全程僅需2~3小時，較傳統培養方法（3~7天）大幅縮短了檢測時間，為感染性疾病的早期診斷與及時治療提供了保障。

本研究的局限性在于樣本量相對有限，且未涉及罕見病原體及變異株的檢測性能評估。未來可進一步擴大樣本規模，探討該儀器在耐藥基因聯合檢測、新型病原體篩查中的應用；同時可結合數字PCR技術，優化低拷貝樣本的定量算法，進一步提升檢測精度。

綜上所述，博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光定量PCR儀在病原體核酸定量檢測與病毒載量監測中表現出高靈敏度、高特異性、良好重復性及臨床一致性，且具備便攜操作、高效快速等優勢，為感染性疾病的診療與防控提供了可靠的國產技術方案，具有廣闊的臨床應用前景。